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Colorants et Indicateurs Colorés

Un clic sur une lettre permet d'accéder au nom du colorant ou de l'indicateur coloré , à sa préparation et à son utilisation.


Protocoles expérimentaux

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Bleu de Bromothymol
Dissoudre 4 g de Bleu de Bromothymol dans 200 ml d’alcool à 95 % Ajouter 200 ml d’eau distillée bouillie et de la soude jusqu’à l’obtention de la coloration verte Ajuster ensuite à 1000 ml avec de l’eau distillée bouillie refroidie
 De couleur verte à pH 7 , il vire au jaune pour un pH inférieur à 6 et au bleu pour un pH supérieur à 7,7
Bleu de méthylène
Dissoudre 1 g de bleu de méthylène dans 1 litre d’eau distillée , bien mélanger
Colorant utilisé essentiellement pour colorer les noyaux et autres structures oxydantes
Bleu de méthylène phéniqué
Dissoudre 2 g de Bleu de méthylène et 20 g de phénol dans 100 ml d’alcool à 95 %
Colorant utilisé en bactériologie ( coloration simple pour bactéries )
Bleu de Toluidine
Dissoudre 0,1 g de bleu de Toluidine dans 100 ml d’eau distillée tamponnée à pH 4,6 ( tampon acétate )
 S'utilise pour colorer les grains d'aleurone des graines à réserves protidiques ...

Carmin acétique
Dissoudre 0,5 g de Carmin 40 pour Histologie , dans un mélange de 55 ml d’eau distillée et 45 ml d’acide Acétique . Porter le mélange à ébullition , et laisser ensuite bouillir 1 à 2 minutes Laisser refroidir , puis filtrer Ce colorant se conserve bien à température ambiante . 		S'utilise à chaud pour colorer les chromosomes des cellules de racines de liliacées
S'utilise à froid pour colorer les chromosomes des cellules des parois de glandes salivaires de chironomes(laisser agir quelques minutes )
Carmin aluné
Dissoudre 1 g de Carmin 40 pour histologie et 4 g d’alun de Potassium dans 100 ml d’eau distillée Porter le mélange à ébullition , laisser refroidir et filtrer
 Colore en rose les tissus contenant de la cellulose ( phloème ... )
Carmin Vert d'iode ( ou Carmino-vert de Mirande )
Dissoudre 6 g de Carmin 40 pour histologie et 12 g d’alun de Potassium , dans 200 ml d’eau distillée Chauffer à feu doux , ajouter 200 ml d’eau distillée et 0,4 g de Vert d’Iode , porter à ébullition puis laisser refroidir et filtrer 		Double coloration des tissus végétaux ( colore en rose les tissus cellulosiques et en vert les tissus lignifiés )

Coloration de Gram

Coloration permettant de mettre en évidence la structure de la paroi des bactéries et ainsi de pouvoir les identifier et les classer .
Les bactéries dites Gram positif , colorées en violet , ont une paroi très riche en peptidoglycane (polymère de glucides ) qui retient le colorant violet, ainsi le rinçage à l'alcool ne parvient pas à éliminer la coloration au cristal violet.
Les bactéries dites Gram négatif , renferment très peu de peptoglycane dans leur paroi et apparaissent colorées en rose par la safranine , le rinçage à l'alcool éliminant la coloration au cristal violet .
Cristal Violet Solution vendue prête à l'emploi
Safranine Solution vendue prête à l'emploi
Liquide de Lugol Solution à 10 g d'iode bisublimé et 20 g d'iodure de potassium pour 1 litre d'eau distillée
Alcool Solution à 95 %
Technique opératoire
Faire un frottis de bactéries à identifier, laisser sécher à l’air libre .
Fixer ce dernier à la flamme, laisser refroidir .
Recouvrir le frottis de Cristal violet 1 min Rincer à l’eau distillée .
Recouvrir la lame de Lugol ( mordant ) 1 min Rincer à l’eau distillée .
Recouvrir la lame d’Alcool 30 s Rincer à l’eau distillée .
Recouvrir le frottis de Safranine 1 min Rincer à l’eau distillée .
Sécher et observer au microscope
Héliantine
Dissoudre 0,2 g d’héliantine dans 1000 ml d’eau distillée chaude Laisser refroidir et filtrer
 De couleur orangé , vire au rose pour un pH inférieur à 3,2 et au jaune pour un pH supérieur à 4,5
Liquide de lugol
Broyer dans un mortier , 1 g d’Iode bisublimé et 2 g d’Iodure de Potassium Dissoudre dans 100 ml d’eau distillée ( ajouter éventuellement un peu d’iodure pour permettre la dissolution totale de l’iode , conserver dans une bouteille en verre brun , s’utilise dilué et se décolore à la longue) 		s'utilise comme colorant des noyaux des cellules végétales et des membranes
Permet la mise en évidence, par coloration, des amyloplastes dans les cellules végétales
Noir Eriochrome T
Dissoudre 0,8 g de noir ériochrome T dans 100 ml d’alcool à 95 %
 S'utilise comme indicateur dans le dosage du calcium par compleximétrie

Orcéine acétique
Dissoudre 1 g d’Orcéine dans 45 ml d’acide Acétique Porter le mélange à ébullition , et laisser bouillir 1 à 2 minutes Laisser refroidir et filtrer Ce colorant se conserve bien au frais (non dilué) 		S’utilise dilué au demi pour la coloration , à froid , des chromosomes des cellules de racines de liliacées, après trempage dans un bain d'acide chlorhydrique
Phénolphtaléine
Dissoudre 1 g de Phénolphtaléine dans 100 ml d’alcool à 95 %
Incolore , vire au rose pourpre pour un pH supérieur à 10
Pyronine
Dissoudre 250 mg de Pyronine , avec 500 mg de phénol , 2,5 ml d’alcool et 20 ml de glycérol , dans 85 ml d’eau distillée Bien mélanger , la solution s’utilise seule ou mélangée à du vert de méthyle ( vert de méthyle, 1g + eau ,100 ml ) 		Colore les ARN en rose
Rouge de Crésol
Dissoudre 0,01 g de Rouge de Crésol , 0,08 g d’hydrogénocarbonate de Sodium et 7, 45 g de Chlorure de Potassium dans 1000 ml d’eau distillée
 De couleur rouge , il vire au jaune pour un pH inférieur à 7,4 et au pourpre pour un pH supérieur à 9
Rouge neutre
Dissoudre 1 g de Rouge Neutre dans 1000 ml d’eau à pH 7 ( tampon phosphate , ou eau de Volvic ) 		Colorant de la vacuole , s'utilise sur toutes les cellules végétales ( épithéliums , poils absorbants ... )il vire au jaune pour un pH supérieur à 8
Rouge de Phénol
Dissoudre 0,1 g de Rouge de Phénol dans 100 ml d’eau distillée
De couleur rouge , il vire au jaune pour un pH inférieur à 6,2 et au rouge pourpre pour un pH supérieur à 8
Rouge Ponceau
Dissoudre 2 g de Rouge Ponceau et 30 g d’acide trichoroacétique dans 1000 ml d’eau distillée
 S'utilise pour colorer les électrophorèses de protéines
Rouge Soudan III
Dissoudre 1 g de Rouge Soudan dans 100 ml d’alcool à 70 % Laisser décanter , puis filtrer 		Peu soluble dans l'alcool et très soluble dans les lipides , il colore les inclusions lipidiques par transfert .
S'utilise sur le lait , des coupes de graines à réserves lipidiques ...
Vert d'iode
Dissoudre 1 g de vert d’iode dans 100 ml d’eau distillée
 Colore en vert les tissus lignifiés ( xylème , sclérenchymes ... )
Vert de méthyle acétique
Dissoudre 1 g de Vert de Méthyle dans un mélange de 55 ml d’eau distillée et 45 ml d’acide Acétique 		S'utilise pour colorer les chromosomes des cellules des parois de glandes salivaires de chironomes
Colore l'ADN en vert

Bibliographie

gsvadmin@ac-toulouse