MISE EN EVIDENCE EXPERIMENTALE DU ROLE DU FOIE
DANS LA REGULATION DE LA GLYCEMIE
Expérience du foie lavé de Claude Bernard.
Foie frais ou congelé de porc,
Ciseaux fins,
Bêcher de 100 mL,
Eau du robinet,
Bandelettes glucose (ex : clinistix,bandelettes réactives au glucose pour analyses d’urine (12 euros les 50 bandelettes)
Passoire,
Eau distillée,
Bec électrique.
Protocole expérimental
1. Découpez l’échantillon de foie en morceaux cubiques de 1 à 2 cm de côté.
2. Lavez soigneusement 1 à 2 morceaux sous le robinet jusqu’à ce que l’eau qui s’écoule soit dépourvue de sang.
3. Placez ces morceaux dans le bêcher contenant 50 mL d’eau distillée.Agitez légèrement et réalisez un test glucose (pour cela tremper une bandelette glucose dans l’eau du bêcher). Notez le résultat R 1.
4. Versez les morceaux de foie dans l’entonnoir (avec ceux des autres élèves) et les lavez soigneusement sous le robinet pendant 10 minutes.
5. Placez ces morceaux dans le bêcher contenant 50 mL d’eau distillée.
6. Agitez légèrement et réalisez un test glucose. Notez le résultat R 2.
7. Laissez les morceaux de foie tremper dans l’eau du bêcher pendant 20 minutes.
8. Réalisez un test glucose. Notez le résultat R 3.
Résultats R1
Résultats R2
Résultats R3
Mise en évidence d’un constituant du foie : le glycogène.
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Réactif chimique d'extraction |
Réactif chimique de manipulation |
Temps de manipulation |
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Méthode de Brücke |
Acide chlorhydrique |
Éthanol |
20 minutes |
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Méthode de Fränkel |
Acide trichloroacétique à 4% |
Éthanol |
10 minutes |
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Méthode de Richet |
Solution de sulfate de sodium |
Éthanol |
10 minutes |
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Méthode de Richet simplifiée |
Sulfate de sodium en poudre |
Éthanol |
10 minutes |
EXTRACTION DU GLYCOGENE
Méthode de Brücke
Matériel utilisé :
# Foie frais ou congelé,
# Ciseaux fins,
# Bêcher de 150 mL,
# Eau du robinet,
# Mortier, pilon, sable de Fontainebleau,
# Tamis,
# Bec bunsen, support de chauffage,
# Appareil de filtration (papier filtre, entonnoir) ou centrifugeuse,
# Verrerie : tube à essai, agitateur, pipette.
# Réactifs : acide chlorhydrique, liquide de Brücke, éthanol à 95%
Liquide de Brücke
Préparation :
- dissoudre à saturation du chlorure mercurique dans 250 mL d’eau distillée
- décanter le liquide.
- verser dans le liquide une solution concentrée d’iodure de potassium dans l’eau : il se produit un précipité rouge d’iodure mercurique qui se re-dissout dans l’iodure de potassium en excès.
- ajouter la solution d’iodure de potassium jusqu’à dissolution complète du précipité.
Protocole expérimental :
1. Découpez 25 à 30 grammes de foie en petits morceaux.
2. Jetez les morceaux dans 100 mL d’eau bouillante et faites bouillir quelques minutes.
3. Passez dans un tamis pour récupérer les morceaux et le liquide.
4. Broyez les fragments dans un mortier avec le sable de Fontainebleau.
5. Faites bouillir le broyat dans le premier liquide d’ébullition jusqu’à l’apparition d’une coloration brune.
6. Filtrez ou centrifugez.
7. Acidifiez le filtrat avec quelques gouttes d’acide chlorhydrique et ajoutez le liquide de Brücke.
8. Remuez avec un agitateur
9. Filtrez ou centrifugez.
10. Précipitez le glycogène en ajoutant deux volumes d’éthanol à 95% pour un volume de filtrat.
EXTRACTION DU GLYCOGENE
Méthode de Fränkel
Matériel utilisé :
# Foie frais ou congelé,
# Ciseaux fins,
# Mortier, pilon, sable de Fontainebleau,
# Appareil de filtration (papier filtre, entonnoir) ou centrifugeuse,
# Verrerie : tube à essai,
# Réactifs : acide trichloroacétique à 4%, éthanol à 95%
Protocole expérimental :
1. Découpez le foie en petits morceaux.
2. Placez les fragments dans un mortier.
3. Recouvrez d’acide trichloroacétique à 4%.
4. Ajoutez le sable de Fontainebleau.
5. Broyez les fragments avec le pilon jusqu’à obtenir une fine purée tout en ajoutant de l’acide trichloroacétique à 4%.
6. Filtrez ou centrifugez.
7. Précipitez le glycogène en ajoutant deux volumes d’éthanol à 95% pour un volume de filtrat.
EXTRACTION DU GLYCOGENE
Méthode de Richet
Matériel utilisé :
# Foie frais ou congelé,
# Ciseaux fins,
# Eau du robinet,
# Mortier, pilon, sable de Fontainebleau,
# Bec bunsen, support de chauffage,
# Appareil de filtration (papier filtre, entonnoir) ou centrifugeuse,
# Verrerie : tube à essai, pipette.
# Réactifs : solution de sulfate de sodium, éthanol à 95%
Protocole expérimental :
1. Découpez le foie en petits morceaux.
2. Jetez les morceaux dans 100 mL d’eau bouillante.
3. Broyez les fragments dans un mortier avec le sable de Fontainebleau.
4. Dispersez le broyat dans la solution de sulfate de sodium.
5. Placez la suspension dans un ballon.
6. Portez quelques minutes à ébullition (sans laisser s’évaporer tout le liquide).
7. Filtrez ou centrifugez.
8. Précipitez le glycogène en ajoutant deux volumes d’éthanol à 95% pour un volume de filtrat.
EXTRACTION DU GLYCOGENE
Méthode de Richet simplifiée
Matériel utilisé :
# Foie frais ou congelé,
# Ciseaux fins,
# Eau du robinet,
# Mortier, pilon, sable de Fontainebleau
# Appareil de filtration (papier filtre, entonnoir) ou centrifugeuse,
# Bec Bunsen,
# Verrerie : tube à essai, ballon, pipette.
# Réactifs : sulfate de potassium en poudre, éthanol à 95%
Protocole expérimental :
1. Découpez le foie en petits morceaux.
2. Broyez les fragments dans un mortier avec le sable de Fontainebleau jusqu'à l'obtention d'une pâte homogène (en ajoutant 20 mL d'eau distillée).
3. Placez la suspension dans un ballon et ajoutez- y une pointe de sulfate de sodium
4. Portez quelques minutes à ébullition (sans laisser s'évaporer tout le liquide).
5. Filtrez ou centrifugez. .
6. Précipitez le glycogène en ajoutant deux volumes d'éthanol à 95% pour un volume de filtrat.
Remarque : on peut aussi révéler le glycogène en ajoutant quelques gouttes d'eau iodée qui prend une coloration brun acajou en présence du polymère de glucose. Pensez alors à faire un témoin.
